ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数纸，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，较呈直线的部分是理想的检测区域。
 

　　E2检测ELISA试剂盒变质的因素：
 

　　操作因素：
 

　　试剂盒操作步骤杂乱，操作不当将引起较大的差错。加样、温育、洗刷、显色、比色。
 

　　样本因素：
 

　　标本搅扰要素包含内源性搅扰要素和外源性搅扰要素，前者包含类风湿因子、补体、异嗜性抗体、本身抗体、等，后者包含标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时刻过长、标本凝结不全、冷冻标本的重复冻融等。
 

　　试剂因素：
 

　　不同批次的ELISA试剂在制作进程中很难保证质量一致，即使是通过批批检的项目其检测成果也存在差异，因而必须挑选和订购长批号的试剂，并保证保存条件。严格执行这一规范可以防止因试剂批号改动而从头建立质控体系及从头评估试剂的杂乱进程，并且能够保证成果的稳定性；关于效期短、使用率低的试剂，应当小量分装，每次使用则取分装部分即可，防止重复冻融造成试剂的失效。