荞麦源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒检测步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
HEC-1A, 人子宫内膜癌细胞系
Caki-1, 人肾透明细胞癌皮肤转移细胞
Ishikawa, 人子宫内膜癌细胞系
ACHN, 人肾细胞腺癌细胞
JEC, 人子宫内膜腺癌细胞系
BPH-1, 人前列腺增生细胞
RL95-2, 人子宫内膜腺癌细胞系
Ca Ski, 人宫颈癌细胞
MCF-7 [MCF7], 人乳腺癌细胞系
Raw264.7, 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
GBC-SD, 人胆囊癌细胞
5637, 人膀胱癌细胞
CNE1, 人鼻咽癌细胞系
HT-29, 人结肠癌细胞
T24, 人膀胱癌细胞
5-8F, 人高转移鼻咽癌细胞系
HCT116, 人结直肠癌细胞
LncaP, 人前列腺癌细胞
6-10B, 人鼻咽癌细胞系
lovo, 人结肠癌细胞
DU 145, 人前列腺癌细胞
Hep-2, 人喉癌细胞系
MDA-MB-231, 人乳腺癌细胞