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十大免费最污黄色软件下载染色的注意问题
点击次数:952 更新时间:2016-01-15

1.十大免费最污黄色软件下载染色可在细胞涂片或组织切片上进行十大免费最污黄色软件下载染色。首先,标记抗体与标本中抗原反应结合。其次,用PBS吸取未结合成分。zui后,直接观察结果(十大免费最污黄色软件下载荧光直接法)或显色后再用显微镜观察(十大免费最污黄色软件下载酶直接法)。在此基础上发展出间接法、多层法,双标记法等各种方法。在十大免费最污黄色软件下载染色中应特别注意增强特异性染色,减少或消除非特异性染色。在各种十大免费最污黄色软件下载染色中都应注意以下几个问题:

(1)增强特异性染色方法

1)蛋白酶消化法:目的是暴露抗原,增加细胞和组织通透性,使抗原抗体zui大限度结合,增强特异性染色和避免非特异性染色。该法已广泛用于各种十大免费最污黄色软件下载细胞化学染色。常用蛋白酶有、及等;酶消化时间和温度因各种抗原对消化的敏感性不同,应根据酶活性通过预实验确定,消化时间还与组织固定的时间有关,越陈旧固定组织所需时间越长,以37℃为宜。

2)适宜的抗体稀释度:抗体浓度是十大免费最污黄色软件下载染色关键步骤。浓度过高,抗体分子多于抗原决定簇,可导致抗体结合减少,产生阴性结果。

3)温育时间:一般抗体温育时间为30~60min,必要时可4℃过夜。温育温度常用37℃,也可在室温中进行。37℃可增强抗原抗体反应,适用于多数抗原染色,但应注意在湿盒中进行,防止切片干燥而导致失败。

4)多层染色法:对弱抗原可用直接法(双层)、辣根过氧化物酶一抗过氧化物酶(PAP)和抗一(ABC)法(j层),四层或五层PAP法或ABC法,或PAP和ABC联合染色法等,可很大程度提高敏感性,获得良好结果。

5)其他增敏方法:如微波处理法、酪氨酰胺信号放大技术(tyramide signal smplmcation,TSA)增敏方法以及十大免费最污黄色软件下载PcR方法等。

(2)减少或消除非特异性染色的方法:组织中,非抗原抗体出现的阳性染色称为非特异性背景染色,zui常见原因是蛋白吸附于高电荷的胶原和结缔组织成分上。有效消除方法是在用*抗体前,加与制备*抗体相同的动物的非十大免费最污黄色软件下载血清(1:20~l:5),封闭组织上带电基团而除去与*抗体非特异性结合。必要时加入2%~5%牛血清白蛋白,可进一步减少非特异性染色,作用时间为lO~20min。

(3)显色反应的控制:十大免费最污黄色软件下载酶染色应注意:1)成色质浓度和反应时间。增加成色质的量和(或)增加底物反应时间,可增加反应产物强度,着色太深可减少反应时间。2)过氧化物酶显色时,H2O2浓度较大将使显色反应过快而导致背景加深,过量H2O2可抑制酶活性。

(4)复染:根据所用实验方法和呈现颜色不同,可选用适当复染方法。如阳性结果呈红色或棕色,则用苏木素将细胞核染成蓝色,以便定位检测。

4.对照设对照目的在于tiEBIj阳性结果的特异性,排除非特异性结果。主要针对*抗体对照,常用对照方法包括:阳性对照、阴性对照、阻断试验、替代对照、空白对照、自身对照和吸收试验。

5.十大免费最污黄色软件下载细胞化学结果判断对十大免费最污黄色软件下载细胞化学结果判断应注意几点:①准确判断阳性和阴性,排除假阳性和假阴性结果,必须严格对照试验,对新发现阳性结果,除有对照试验结果之外,应进行多次重复试验,并用几种方法进行验证。②判定特异性染色和非特异性染色:特异性反应产物常分布于特定部位,且在同一切片上呈现不同程度阳性染色结果。而非特异性染色表现为无一定的分布规律,常呈某一部位成片的均匀着色,细胞和周围结缔组织均无区别着色,或结缔组织呈现很强的染色;常出现于干燥切片边缘,有由于过强刀痕或自制折叠的部位;在过大组织块,中心固定不好也会造成非特异染色。当非特异性染色和特异性染色同时存在时,过强的非特异性染色背景会影响对特异性染色结果的观察和记录。

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